课程：

• 1、生物化学中的细胞定位是什么意思
• 2、什么是细胞共定位技术？
• 3、亚细胞定位时,目的基因的蛋白和GFP融合？用去除终止密码子吗？怎么去除?融合载体和表达载体有什么不同的？
• 4、DFP亚细胞定位主要用作什么方面？可以打个比方么？

生物化学中的细胞定位是什么意思

是亚细胞定位吧，亚细胞定位是指某种蛋白或表达产物在细胞内的具体存在部位。例如在核内、胞质内或者细胞膜上存在。GFP是绿色荧光蛋白，在扫描共聚集显微镜的激光照射下回发出绿色荧光，从而可以精确地定位蛋白质的位置。GFP，实际是给你要研究的物质加上标记，在此相当于报告蛋白的作用。使用GFP必须构建融合蛋白载体，并在转染之后有效表达。这样，若在荧光显微镜下看到细胞内某一部位存在GFP信号，说明和GFP融合的蛋白也存在于该部位，这样就达到了确定某物质亚细胞定位的目的。

什么是细胞共定位技术？

亚细胞定位是指某种蛋白或表达产物在细胞内的具体存在部位。如仅在核内存在，还是胞质内存在，还是细胞膜上存在。

gfp实际是给你要研究的物质加上标记。使用gfp必须构建融合蛋白载体，并有效表达。这样在荧光显微镜下，如果看到细胞内某一部位存在gfp信号，则说明和gfp融合的蛋白也存在于该部位，这样就达到了确定某物质亚细胞定位的目的。

亚细胞定位时,目的基因的蛋白和GFP融合？用去除终止密码子吗？怎么去除?融合载体和表达载体有什么不同的？

亚细胞定位时，GFP蛋白是指示蛋白，你的目的蛋白和GFP蛋白融合到一起，显示荧光的部位便是你目的蛋白定位的部位，所以要保证两个蛋白融合为一条肽链，那么就一定要去掉目的蛋白的终止子，否则使翻译提前终止，不能使它们连接为一条肽链。去掉的方法就是设计PCR引物的时候引物不要包括终止密码子即可。融合载体也是表达载体的一种，只是载体上面有自带的某些报告基因，如GFP，GUS等。如还有疑问，可以继续提问。

DFP亚细胞定位主要用作什么方面？可以打个比方么？

难道又推出新的荧光蛋白了？目前主要用作亚细胞定位的是GFP绿色萤光蛋白，就是因为这个今年3个哥们得了诺贝尔化学奖。

亚细胞定位就是看目的基因的表达产物被定为在细胞的哪个位置，比如细胞核或细胞质。

操作上一种方法是在你要表达的基因上加上高效启动子和一段GFP序列，用基因枪将你整合的序列打入一些植物组织，比如洋葱表皮，培养一小段时间。荣荧光显微镜观察，相应的亚细胞结构会呈现绿色。以此来判断你要研究的基因产物在细胞中位置。