课程：

• 1、如何预测蛋白质的亚细胞定位
• 2、DFP亚细胞定位主要用作什么方面？可以打个比方么？
• 3、真核细胞亚细胞定位实验的原理及步骤？
• 4、亚细胞定位用gfp号还是yfp好

如何预测蛋白质的亚细胞定位

如何预测一个基因的亚细胞定位

预测蛋白质的亚细胞定位，是通过生物信息学的方法的。

或者你在NCBI数据库中比对到了编码类似蛋白的基因，如果该基因有人做过亚细胞定位的实验，你也可以大概知道其编码的蛋白质在细胞内部的定位。不同物种，不同基因家族成员有可能有区别。最终还是需要实验来验证的。

功能基因研究中，经常会进行基因编码的蛋白质的亚细胞定位的，

如待定位蛋白和GFP、YFP、RFP等融合后，观察融合蛋白在细胞内的定位，

或者将预测部位（如该蛋白可能在液泡膜上）的蛋白提取出来，进行western实验，来验证等。

希望对你有帮助吧

DFP亚细胞定位主要用作什么方面？可以打个比方么？

难道又推出新的荧光蛋白了？目前主要用作亚细胞定位的是GFP绿色萤光蛋白，就是因为这个今年3个哥们得了诺贝尔化学奖。

亚细胞定位就是看目的基因的表达产物被定为在细胞的哪个位置，比如细胞核或细胞质。

操作上一种方法是在你要表达的基因上加上高效启动子和一段GFP序列，用基因枪将你整合的序列打入一些植物组织，比如洋葱表皮，培养一小段时间。荣荧光显微镜观察，相应的亚细胞结构会呈现绿色。以此来判断你要研究的基因产物在细胞中位置。

真核细胞亚细胞定位实验的原理及步骤？

原核细胞（Prokaryotic cells），也就是细菌等生物体的简单细胞，有时被比喻为单间小屋：它们没有内部膜，所以它们就像一个单间，没有墙壁可以分割。如果我们把这个类比扩展到真核细胞，也就是构成植物、真菌和动物的更复杂的细胞，我们会发现，它们在房地产市场上是绝对升值的。

就像一个大的家庭住宅被分割成许多不同用途的房间（卧室、浴室、厨房、起居室等），真核细胞也包含了各种不同的具有专门功能的隔间，彼此之间用膜层整齐地分开。这种组织方式让每个隔室都能保持自己的条件，也就是它开展工作所需要的条件。

例如，被称为溶酶体（lysosomes）的隔室，作为细胞的回收中心，必须保持一个酸性的pH值，以处理细胞废物。同样，被称为过氧化物酶体（peroxisomes）的结构也会进行被称为氧化反应的化学反应，并产生过氧化氢，如果不把它们安全地存放在自己的 "房间 "里，这两种物质都会损害细胞。

在一个细胞内保持不同环境的能力，使得真核细胞可以进行复杂的代谢反应，而原核生物则不能。事实上，这也是为什么真核细胞可以长到比原核细胞大很多倍的重要原因。

原核细胞对比真核细胞

真核细胞的主要特征是什么？与原核细胞不同，真核细胞具有：

一个膜结合的细胞核（nucleu），一个被膜包围的中央空腔，里面有细胞的遗传物质。

一些膜结合的细胞器（organelles），是漂浮在细胞液中的具有特殊功能的细胞室。细胞器的意思是 "小器官"，这个名字反映了细胞器就像我们身体的器官一样，作为一个更大系统的一部分，具有独特的功能。

多条线型染色体（linear chromosomes），而不是原核生物的单条圆形染色体（single circular chromosome）。

真核细胞比原核生物的细胞要复杂得多。它们充满了一系列迷人的亚细胞结构，在能量平衡、新陈代谢和基因表达方面发挥着重要作用。

亚细胞定位用gfp号还是yfp好

YFP和GFP其实是序列基本相同的两种蛋白

GFP就是绿色荧光蛋白，YFP就是Thr203以Tyr取代，发出黄色的荧光，成为黄色荧光蛋白

因此两者最大的区别则是发射波长了

亚细胞定位用YFP或者GFP都是可以的

需要考虑：

如果是标记在N端很可能影响定位

如果是红色的探针，选用绿色GFP比较经典，两者叠合的橙色也是很多文献上常采用的。但如果是蓝色的探针，则选用黄色YFP比较容易区分一点