课程:
Mito Tracker Red CMXRos的标记原理是什么?
原理:用于对活细胞线粒体进行染色,该染料的积累取决于膜电位。
定义:MitoTracker Red CMXRos 是一种红色荧光染料,用于对活细胞线粒体进行染色,并且该染料的积累取决于膜电位。乙醛固定后,该染料可稳定保存。
荧光染料常用于荧光染料产品的制备,以及增白洗衣粉中的增白剂,指示信号用的各种荧光路标漆,荧光标志服等。
荧光染料的其他用途包括: 渗漏污水系统包括水和工业的污染物、连接系统、测量发电厂排出的液体、洗手间的渗漏、非法的连接污水管监察,研究流量和绘图,分析腐败的系统,此外还用于纤维织物印染和某些特种标志(如暗处符号)及军事追踪等。
扩展资料:
荧光标记的单克隆抗体技术为流式细胞仪在研究细胞膜和细胞内各种功能性抗原、肿瘤基因蛋白等领域扩展了无限的应用空间。
荧光探针可以通过蛋白质交联剂共价结合在单克隆抗体上。免疫荧光标记最常用的染料有异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)、藻红蛋白(PE)以及AlexaFluor系列染料等。
核酸荧光染料对细胞核染色后定量测量细胞所发出的荧光强度,就可以确定细胞核中DNA、RNA的含量,并可以对细胞周期和细胞的增殖状况进行分析。
有多种荧光染料可以对细胞中的DNA或RNA染色,常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst 33342等,RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。
参考资料来源:百度百科-荧光染料
细胞自噬的自噬形式
细胞自噬主要有三种形式:微自噬(microautophagy)、巨自噬(macroautophagy)和分子伴侣介导的自噬 (Chaperone-mediated autophagy,CMA)。 定义:指溶酶体或者液泡内膜直接内陷底物包裹并降解的过程。
作用时间:多在种子成熟时储藏蛋白的沉积或萌发时储存蛋白的降解中起作用。 定义:在其过程中,底物蛋白被一种双层膜的结构(粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜)包裹后形成直径约400~900纳米大小的自噬小泡(autophagosome),接着自噬小泡的外膜与溶酶体膜或者液泡膜融合,释放包裹底物蛋白的泡状结构到溶酶体或者液泡中,并最终在一系列水解酶的作用下将其降解,我们将这种进入溶酶体或者液泡腔中的泡状结构称为自噬小体。
作用时间:营养缺乏条件下培养的细胞、植物的免疫反应、叶片衰老及环境胁迫应答。 (1) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin :模拟内质网应激
(2) Carbamazepine/ L-690,330/ Lithium Chloride(氯化锂):IMPase 抑制剂(即Inositol monophosphatase,肌醇单磷酸酶)
(3) Earle's平衡盐溶液:制造饥饿
(4) N-Acetyl-D-sphingosine(C2-ceramide):Class I PI3K Pathway抑制剂
(5) Rapamycin:mTOR抑制剂
(6) Xestospongin B/C:IP3R阻滞剂 (1) 3-Methyladenine(3-MA):(Class III PI3K) hVps34 抑制剂
(2) Bafilomycin A1:质子泵抑制剂
(3) Hydroxychloroquine(羟氯喹):Lysosomal lumen alkalizer(溶酶体腔碱化剂)
除了选用上述工具药外,一般还需结合遗传学技术对自噬相关基因进行干预:包括反义RNA干扰技术(Knockdown)、突变株筛选、外源基因导入等。 细胞经诱导或抑制后,需对自噬过程进行观察和检测,常用的策略和技术有:
1、观察自噬体的形成
由于自噬体属于亚细胞结构,普通光镜下看不到,因此,直接观察自噬体需在透射电镜下。Phagophore的特征为:新月状或杯状,双层或多层膜,有包绕胞浆成分的趋势。自噬体(AV1)的特征为:双层或多层膜的液泡状结构,内含胞浆成分,如线粒体、内质网、核糖体等。自噬溶酶体(AV2)的特征为:单层膜,胞浆成分已降解。(autophagic vacuole,AV)
2、在荧光显微镜下采用GFP-LC3融合蛋白来示踪自噬形成
由于电镜耗时长,不利于监测(Monitoring)自噬形成,人们利用LC3在自噬形成过程中发生聚集的现象开发出了此技术。无自噬时,GFP-LC3融合蛋白弥散在胞浆中;自噬形成时,GFP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜,在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点,一个斑点相当于一个自噬体,可以通过计数来评价自噬活性的高低。
3、利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价自噬形成
自噬形成时,胞浆型LC3(即LC3-I)会酶解掉一小段多肽,转变为(自噬体)膜型(即LC3-II),因此,LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。
(注意:LC3抗体对LC3-II有更高的亲和力,会造成假阳性。方法2和3需结合使用,同时需考虑溶酶体活性的影响。)
4、检测长寿蛋白的批量降解:非特异
5、MDC(Monodansylcadaverine,单丹磺酰尸胺)染色:包括自噬体,所有酸性液泡都被染色,故属于非特异性的。
6、CellTrackerTM Green染色:主要用于双染色,但其能染所有的液泡,故也属于非特异性的。 在研究自噬相关蛋白时,需对其进行定位。由于自噬体与溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体关系密切,为了区别,常用到一些示踪蛋白在荧光显微镜下来共定位:
Lamp-2:溶酶体膜蛋白,可用于监测自噬体与溶酶体融合。
LysoTrackerTM 探针:有红或蓝色可选,显示所有酸性液泡。
pDsRed2-mito:载体,转染后表达一个融合蛋白(红色荧光蛋白+线粒体基质定位信号),可用来检测线粒体被自噬掉的程度(Mitophagy)。
MitoTraker探针:特异性显示活的线粒体,荧光在经过固定后还能保留。
Hsp60:定位与线粒体基质,细胞死亡时不会被释放。
Calreticulin(钙网织蛋白):内质网腔
mitoq产品为什么同时不能超过两种
mitoq产品同时不能超过两种是为了避免补充过多同类营养素。MitoQ品牌旗下所有产品都含有核心成分MitoQ分子,因此不宜搭配超过两种MitoQ同品牌产品,以免补充过多同类营养素,MitoQ是新西兰生物技术公司旗下的品牌。
其致力于帮助人类找回随时间流逝的健康和美丽,MitoQ旗下产品线包括美容系列和健康系列,而其产品的核心专利技术MitoQ分子,可以减缓线粒体的氧化应激损伤,激活细胞能量,从而支持器官功能,改善长期健康水平。
mitoq产品特色
它是全球首款线粒体靶向抗氧化胶囊,也是MitoQ最经典的明星产品。它能精准定位人体的生命发电机,线粒体细胞器,向其补充辅酶Q10,促进多种细胞产生能量,同时加快新陈代谢。
不但能修护细胞、对抗细胞氧化,还能提升人体各项组织活力、改善肌肤状态,让人体细胞更加年轻、有活力,实现从内而外的健康状态,MitoQ其实是他家专利成分的名字,是一种超强抗氧化剂,可以直接作用于细胞线粒体,大大提高抗氧效果。
所有产品里面都有这个成分,能用成分名字做产品名这成分得多牛啊,他家产品定位高端,主要是有好多专利成分,还有其他成分也都是用最好的。品牌宣传不多,但是成分是真的好。