课程：

• 1、小鼠脑立体定位坐标怎么看
• 2、脑立体定位仪如何插耳杆？

小鼠脑立体定位坐标怎么看

往往是参考文献上已有的坐标，然而却发现仅根据文献上的坐标去定位核团往往达不到理想的定位效果，这边我们建议各位老师首先参考脑定位图谱，了解目标核团的大小和形状，这样在进行病毒注射的时候，才能做到有的放矢。根据研究目的和小鼠种类不同，分别选择对应的Paxinos Watson脑立体定位图谱（复制如下链接可下载/在线阅读）。在选择了正确的图谱后，动物的体重应该和图谱尽量一致，这些信息在图谱的introduction里面有详细的介绍（例如：雄性Wister大鼠，290g左右脑立体定位图谱的两个重要平面是什么？首先我们需要明确，大鼠在使用脑立体定位图谱时，需要满足颅骨水平位，而使用颅骨水平位的原因是，脑立体定位的中线旁开坐标以及深度坐标就是根据颅骨水平位来确定的（也就是前囟-人字点、人字点-对耳线两个平面来确定的，如图2）。因此在固定大鼠的时候，需要调整定位仪的门齿杆位置低于水平线3.3±0.4，即达到颅骨水平位。如何确定目的核团坐标？在翻到该核团所在的页面，多是冠状切面，核团的长度要看所占的页数（右下角有一个Bregma值，用第一页的这个数值减去最后一页的这个数值就是核团的长度）。根据这些数据估算核团的长度。核团的宽度、高度可直接由图上的坐标读出，即在各页面上挑选一个横截面最大的，在核团中心点一点，经这个点划水平线和垂直线，水平线和纵坐标的交点就是核团的深度坐标（颅骨下多少mm），垂直线和横坐标的交点就是核团左右坐标（中线旁开多少mm），右下角的Bregma值就是核团的前后坐标（正值代表前囟前，负值代表前囟后，前囟是骨缝冠状缝和矢状缝的交点）。

3、脑立体定位及病毒注射

3.1 实验注意事项：

a. 首先根据以上的注意事项找准脑立体定位点。

b. 荧光、有色染料预实验：在病毒注射之前，为了确定核团定位是否正确，推荐神经顺行示踪的DiI染料于注射后1周，神经逆行示踪的荧光金（Flouro gold）染料于注射后2周切片，并对照图谱确认注射的核团位点无误，再进行病毒注射，可有效提高病毒标记的成功率。冰冻切片时注意，先从所要核团外开始切（还不到核团所在层面），拿到的切片对照图谱中的一些参照物来判断核团是否准确（对照物可选大而清晰的海马、视交叉，脑室、核团附近的特殊结构如纤维索等等），切片同时注意调节冻台角度，使切片角度与图谱一致。

c.注意小鼠的状态：由于俯卧体位以及脑立体定位仪的夹持，容易造成小鼠窒息死亡，因此需要随时确认小鼠气道通畅。另外，对于手术切开的部位，应适当滴加生理盐水，防止伤口干燥。

d. 大鼠颅骨水平位定位操作：定位时将大鼠固定成颅骨水平位后，先定位到前囟，以前囟为原点，向前或向后、向左或向右、向下（先在颅骨上打孔）到达核团位置，需要强调的是，坐标是以前囟为原点，而不是以钻孔后的脑表面为原点。

e. 熟能生巧：通过多加练习，最后能根据所用动物的体重对坐标做相应的修正，保证一定得准确率，立体定位也就成功了。

3.2 小鼠固定及病毒注射实验：

a. 将麻醉剔毛后的小鼠固定到立体定位仪上。

b. 固定时，先将小鼠门齿卡在适配器门齿夹上，轻轻压上门齿夹横杆，调整适配器高度和前后，使耳杆可以方便进入小鼠外耳道，且调整定位仪的门齿杆位置低于水平线3.3±0.4，即达到颅骨水平位。

c. 左手托起小鼠头部，将左侧耳杆插入小鼠耳道，调节左右侧耳杆使动物头部保持在U型开口的中心位置，先锁紧固定一侧耳杆，后旋紧另一侧耳杆，使动物头部不能晃动，同时旋紧门齿夹螺丝。

d. 检查是否固定成功：鼻对正中，头部不动，提尾不掉，目测大脑放置水平。

e. 用脱毛膏或者剃刀将需要手术部位的毛发去除。

f. 然后用手术刀划开小鼠头部皮肤，去除颅骨表面结缔组织，暴露前后囟（图3）。首先了解小鼠脑部结构的大概位置，主要讲述侧脑室和海马区域的位置利用某些颅骨外面的标志(如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢状缝等)或其它参考点所规定的三维坐标系统，来确定皮层下某些神经核团结构的位置.

注意：操作为大鼠上门齿卡入横杆，调节旋钮压紧鼻杆；将耳杆插入大鼠耳道，平衡调节左、右耳杆，使大鼠两耳间连线与耳杆在同一直线上，保证左、右耳杆的刻度位置相同后调节旋钮锁紧耳杆。大鼠固定完好的判断标准：鼻对正中，头部不动，提尾不掉，目测大脑放置水平（使颅骨水平）。

2. 前囟点即Bregma点，位于冠状缝和矢状缝的交接处，以其作为颅骨三维坐标系统原点O。

3. Bregma点定位过程大体分为: 选定脑部靠中间的位置。剪除大鼠顶被毛后，用碘酒或酒精消毒，纵向切开头皮，用止血钳将皮肤左右分开，用刀片刮去颅盖骨膜，或用双氧水腐蚀头盖骨膜，彻底去除骨膜后让Bregma点显现出来。用脑定位仪读取Bregma点数值作为三维坐标原点O。

4. 侧脑室位置的定位，以眼间连线的中点为起点，垂直于眼间连线后移3-4 mm，然后侧移1.1 mm左右，向下3 mm左右，即进入侧脑室。

具体的位置依据小鼠的脑大小确定，坐标值，即ML值（X轴）、AP值（Y轴）、DV值（Z轴）。侧脑室位置为前囟点旁开1.5 mm，向后囟方向1.1 mm，深2.0 mm（坐标即为±1.5，-1.1，-4.5）。调节X轴（1.5个单位）及Y轴（1.1个单位）旋钮移动操作臂到坐标位置。

海马区域的位置，X= 1.5 mm, Y = 2 mm, Z= 1.5 mm。

5. 10ul的微量注射器，注射剂量是2ul（两侧注射，各1 ul）,打药时间2 min左右，打药之后再停留2 min，然后慢慢的拔出注射器针头。

脑立体定位仪如何插耳杆？

小鼠一般插入耳蜗，大鼠一般插入耳道,具体位置什么的可以找图片，找不到就问瑞沃德的客服要，当初就是这样做的，一般都会给